Mouse visceral tissue samples are ground to extract nucleic acids and microorganisms

 Industry news    |      2017.12.29    |      Mouse visceral tissue samples are ground to extract nucleic acids and microorganisms

近(jin)期的(de)組織研磨和樣品(pin)處理分享(xiang)、討論,我們邀請(qing)到了(le)實驗動物監測(ce)所老(lao)師給大家分享(xiang),內容是(shi)——小鼠內臟組織樣品(pin)研磨提(ti)取(qu)核酸、微生物,研磨使用(yong)的(de)儀器是(shi)洛尚(LAWSON)組織研磨儀。  實例1:加裂解液(ye)直接勻漿

1、取適(shi)量組織(zhi)裝入離心管,組織(zhi)盡(jin)量剪碎成小塊(kuai);

2、在離(li)心管中加入氧化鋯珠數顆(一(yi)次性使用);

3、先加入(ru)Trizol(不建議加入(ru)太(tai)多 Trizol,液體(ti)體(ti)積過(guo)大影響勻漿效果(guo)),蓋(gai)好管蓋(gai),裝(zhuang)入(ru)洛尚(LAWSON)組織研磨儀(yi)適配器中(zhong),安裝(zhuang)上機。

4、組(zu)織研磨(mo)儀研磨(mo)參數(shu)設置為一定轉(zhuan)速(su),研磨(mo)時(shi)間(jian)(jian)為2~5min(不同組(zu)織研磨(mo)時(shi)間(jian)(jian)不同,腦1min,肝臟(zang)(zang)、脾臟(zang)(zang)和腎臟(zang)(zang)2min、肺臟(zang)(zang)比較難(nan)研磨(mo)需3~5min,可能更長(chang),中(zhong)間(jian)(jian)應停頓(dun)1~2次防止(zhi)溫度過高,研磨(mo)前最好先用液氮或放(fang)置在-80度冰箱預冷(leng));

5、再加入適(shi)量(liang)Trizol至總體積;

6、后面步驟按Trizol說明(ming)進行。

實例2:先勻漿,再取一定(ding)量(liang)液(ye)(ye)體加(jia)裂解液(ye)(ye)進(jin)行核酸(suan)抽提,本protocol適用提取小(xiao)鼠組織中的(de)病毒(du)的(de)核酸(suan)

1、取適(shi)量組織(zhi)裝入離心管(guan),組織(zhi)盡(jin)量剪(jian)碎成小塊,樣品量較多時使用大離心管(guan);

2、在離心管中加入氧(yang)化(hua)鋯珠數顆(ke),使(shi)用(yong)大(da)離心管時,可以(yi)將氧(yang)化(hua)鋯珠數量增加;

3、加入適量的(de)滅菌(jun)PBS或(huo)生(sheng)理(li)鹽水(shui),總(zong)體(ti)積為離心管(guan)(guan)單管(guan)(guan)體(ti)積的(de)1/3~1/2為好(hao),蓋好(hao)管(guan)(guan)蓋,裝入洛尚(LAWSON)組織研磨儀適配器中,安(an)裝上機(研磨前(qian)最好(hao)先(xian)用液氮或(huo)放(fang)置在-80度冰箱預冷)。

4、洛尚(shang)(LAWSON)組(zu)織研(yan)(yan)磨儀參數(shu)設置為一定轉速,研(yan)(yan)磨時(shi)間為1~5min(不同組(zu)織研(yan)(yan)磨時(shi)間不同,腦(nao)1min,肝臟、脾臟和(he)腎(shen)臟2min、肺臟比較難研(yan)(yan)磨需(xu)3~5min,可能(neng)更長,中(zhong)間應停(ting)頓(dun)1~2次防止溫度過高(gao)),若研(yan)(yan)磨不充分,可以(yi)繼續研(yan)(yan)磨到充分為止;

5、一定溫度、轉速(su),離心數(shu)分鐘;

6、取(qu)上清液(ye)按照(zhao)試(shi)(shi)劑盒(he)說明書進行后續提取(qu)步驟(zou)。 實驗1中,我(wo)們之前試(shi)(shi)過一齊加(jia)1ml的Trizol,可能是體(ti)積(ji)過大,反而勻漿效果不(bu)好(hao),所(suo)以就改成先加(jia)一部分裂解先勻漿,然后再補齊1ml體(ti)積(ji)。